全排風生物安全柜是為操作原代培養物、菌毒株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的。在使用時要注意以下事項：
1.要根據國家標準和有關的規定，向所有可能使用全排風生物安全柜的用戶解釋安全柜的使用及限制條件。操作人員要了解生物安全柜的安全手冊和使用說明。要注意在出現濺灑、破碎、使用不當的情況下，安全柜是無法保護操作人員的。
2.全排風生物安全柜內單向氣流的一致性易受干擾，很容易被安全柜附近人員的走動、開窗、送風配風器、門的開關所干擾。應將安全柜放置在遠離活動及可能有干擾氣流的地方。應盡量在安全柜的四周留下不小于30厘米的空間，便于維護作業。柜子上方則留下30~35厘米的高度，以便對排風過濾器的風速進行測量，并為排風過濾器的更換留下足夠空間。
3.只有在確認生物安全柜正常時才能使用，安全柜前臉的玻璃觀察窗不得在安全柜處使用狀態時打開。柜內放置的儀器和材料必須保持在zui低數量。靜壓箱后部的空氣循環不得受阻。將材料放入安全柜的工作區之前，應對其表面進行去污處理。
4.在生物安全柜內所形成的幾乎沒有微生物的環境中，應避免使用明火。使用明 火會對氣流產生影響，并且在處理揮發性物品和易燃物品時，也易造成危險。 在對接種環進行滅菌時，可以使用微型電焚燒爐，但使用一次性滅菌環則更好。
5.柜內所有的工作要在工作面的中部或后部進行，并能從觀察面板中看到。操作手后方的活動要達到zui少。操作手不應將手臂來回伸進出柜子，以免干擾氣流。
6.前送風格柵不得被便簽、滴管、或其他材料堵住，否則會干擾氣流從而可能使材料受到污染，使人員處在暴露狀態。
7.應在每次工作完成后及一天結束時，使用合適的消毒劑清潔全排風生物安全柜的表面。生物安全柜內的所有物品，包括設備，都應在工作完成之后進行表面去污處理并從柜內取出，因為殘留的培養介質可能會提供微生物的生長條件。安全柜的內表面應在每次使用前與使用后進行去污處理。要用消毒劑擦拭工作臺表面及內壁面，使用的消毒劑應能殺死柜內可能存在的所有微生物。一天工作結束時，應進行zui后表面去污處理，即對工作臺、各個側面、背面及玻璃的里面進行全面擦拭。可以使用漂白粉液或70%酒精，這種對目標生物有效的消毒劑。如使用漂白粉液這種有腐蝕性的消毒劑，則要用滅菌水進行二次擦拭。建議工作柜在清潔、消毒時處在工作狀態。如果其未處在工作狀態，則應運行5分鐘，以便在安全柜關閉前將其中的氣體清除掉。
8.在開始工作以前以及完成工作以后，應至少讓全排風生物安全柜工作5分鐘來完成"凈 化"的過程，應即應留在將污染的空氣派出安全柜的時間。
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